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Determination of absolute intramolecular distances in proteins using anomalous X-ray scattering interferometry

Samuel Stubhan, Anna V. Baptist, Caroline Körösy, Alessandra Narducci, Gustavo Gabriel Moya Muñoz, Nicolas Wendler, Aidin Lak, Michael Sztucki, Thorben Cordes, Jan Lipfert

Nanoscale· Volume 17· Issue 6

Abstract

Biomolecular structures are typically determined using frozen or crystalline samples. Measurement of intramolecular distances in solution can provide additional insights into conformational heterogeneity and dynamics of biological macromolecules and their complexes. The established molecular ruler techniques used for this (NMR, FRET, and EPR) are, however, limited in their dynamic range and require model assumptions to determine absolute distance or distance distributions. Here, we introduce anomalous X-ray scattering interferometry (AXSI) for intramolecular distance measurements in proteins, which are labeled at two sites with small gold nanoparticles of 0.7 nm radius. We apply AXSI to two different cysteine-variants of maltose binding protein in the presence and absence of its ligand maltose and find distances in quantitative agreement with single-molecule FRET experiments. Our study shows that AXSI enables determination of intramolecular distance distributions under virtually arbitrary solution conditions and we anticipate its broad use to characterize protein conformational ensembles and dynamics.
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Research context

OpenAlex topics: Protein Structure and Dynamics · Enzyme Structure and Function · Molecular spectroscopy and chirality

SciVX discovery tags are terminology-based. OpenAlex topics are source-provided classifications.

Affiliations

Department of Physics and Center for NanoScience, LMU Munich, Amalienstr. 54, 80799 Munich, Germany

Soft Condensed Matter and Biophysics, Department of Physics and Debye Institute for Nanomaterials Science, Utrecht University, Princetonplein 1, 3584 CC Utrecht, The Netherlands

Max Planck Institute of Biochemistry, Am Klopferspitz 18, 82152 Martinsried, Germany

Physical and Synthetic Biology, Faculty of Biology, LMU Munich, Großhadernerstr. 2-4, 82152 Planegg-Martinsried, Germany

ESRF, 71 Avenue des Martyrs, 38043 Grenoble, France

Biophysical Chemistry, Faculty of Chemistry and Chemical Biology, Technische Universität Dortmund, Otto-Hahn-Str. 4a, 44227 Dortmund, Germany

Institute for Physics, Augsburg University, Universitätsstrasse 1, 86159 Augsburg, Germany

Funding

European Research Council · Bundesministerium für Bildung und Forschung · Deutsche Forschungsgemeinschaft

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